F-DH5α快速轉化感受態(tài)細胞

產(chǎn)品規格CAT#: BFNC86033-01(20×100ul)/BFNC86033-02(100×100ul)

F-DH5α：                                                   100μl/支

pUC19 (control vector，10pg/μl):                   10μl

保存條件(保質(zhì)期)：                            -80℃（6個(gè)月）

基因型

F-φ80 lac ZΔM15 Δ(lacZYA-arg F) U169 endA1 recA1 hsdR17(r_k^-,m_k⁺) supE44λ- thi -1 gyrA96 relA1 phoA

產(chǎn)品說(shuō)明

DH5α菌株是實(shí)驗室常用的感受態(tài)細胞。 缺失核酸內切酶 (endA)，提高了質(zhì)粒DNA的產(chǎn)量和質(zhì)量；重組酶缺陷型 (recA)減少插入片段的同源重組概率，保證了插入DNA 的穩定性；lacZΔM15的存在使DH5α可用于藍、白斑篩選。

青旗生物生產(chǎn)的F-DH5α感受態(tài)細胞經(jīng)特殊工藝制作，無(wú)需42℃熱激，37℃孵育步驟，只需冰浴，10min內完成轉化、涂板操作，pUC19質(zhì)粒檢測轉化效率可達1~5×10 ⁸cfu/μg DNA。

F-DH5α快速轉化感受態(tài)細胞

快速轉化操作方法 (10min)

1. 提前15分鐘將用到的篩選培養基平板拿到37℃預熱。

2. F-DH5α感受態(tài)細胞從-80℃拿出，迅速插入冰中，5分鐘后待菌塊融化，加入目的DNA（質(zhì)?；蜻B接產(chǎn)物）并用手bo打EP管底輕輕混勻,，冰中靜置5分鐘。

3. 用200 μl槍將感受態(tài)細胞-DNA混合物轉移到已經(jīng)37℃預熱的LB培養基上，涂均勻，表面無(wú)水漬。

4. 將平板倒置放于37℃培養箱過(guò)夜培養。如果進(jìn)行藍白斑篩選操作，將平板放37℃培養至少15h。

快速熱激轉化操作方法 (25min,可提高轉化效率)

1. F-DH5α感受態(tài)細胞從-80℃拿出，迅速插入冰中，5分鐘后待菌塊融化，加入目的DNA (質(zhì)?；蜻B接產(chǎn)物)并用手bo打EP管底輕輕混勻,，冰中靜置5分鐘。

2. 42℃水浴熱激45秒，迅速放回冰上并靜置2分鐘 (晃動(dòng)會(huì )降低轉化效率)。加入700 μl 不含抗生素的LB，37℃，200 rpm 復蘇10分鐘，涂板 (均勻，表面無(wú)水漬)。

3. 將平板倒置放于37℃培養箱過(guò)夜培養。如果進(jìn)行藍白斑篩選操作，將平板放37℃培養至少15h。

注意事項

1. F-DH5α快速轉化感受態(tài)細胞也可進(jìn)行熱激操作，對于>7 kb質(zhì)粒的構建，為了提高轉化效率可按以下步驟操作：F-DH5α感受態(tài)細胞從-80℃拿出，插入冰中，5分鐘后，加入目的DNA并用手bo打EP管底輕輕混勻，冰中靜置20分鐘。42℃水浴熱激45秒，迅速放回冰中靜置2分鐘。加入700 μl LB，37℃，200 rpm復蘇30分鐘，涂板。

2. 感受態(tài)細胞適宜在冰中緩慢融化。插入冰中8分鐘內加入目標DNA，不可在冰中放置時(shí)間過(guò)長(cháng)，長(cháng)時(shí)間存放會(huì )降低轉化效率，混入目的DNA時(shí)應輕柔操作。

3. F-DH5α快速轉化感受態(tài)細胞涂氨芐/羧芐青霉素抗性平板時(shí)效率較高，若涂卡那霉素或其他抗生素平板，轉化效率下降(因無(wú)孵育步驟，卡那霉素等對菌體毒性較大)。若要提高卡那霉素或其他抗性質(zhì)粒的轉化效率，可按熱激轉化操作，增加孵育步驟。