BW25113化學(xué)感受態(tài)細胞

產(chǎn)品規格CAT#: BFNC86032-01(10×100ul)/BFNC86032-02(50×100ul)

BW25113:                                                   100μl/支

pUC19 (control vector，10pg/μl):                     10μl

保存條件（保質(zhì)期）：                         -80℃（6個(gè)月）

基因型

F-, DE(araD-araB)567, lacZ4787(del)::rrnB-3, LAM-, rph-1, DE(rhaD-rhaB)568, hsdR514

BW25113化學(xué)感受態(tài)細胞

產(chǎn)品說(shuō)明

BW25113菌株來(lái)源于E. coli K-12 W1485，是K12的衍生菌株，與MG1655類(lèi)似，也是一種經(jīng)過(guò)較少改造，比較接近于“野生型"的大腸桿菌工程菌株。BW25113作為母系菌株，可以用來(lái)制作E. coli Keio Knockout 文庫；同時(shí)可作為大腸桿菌模式菌株使用，用來(lái)制作各種基因的Knockout突變體。另外，BW25113可用于構建，擴繁質(zhì)粒使用，不含核酸酶endA1突變，體內核酸酶含量較高，提取質(zhì)粒時(shí)務(wù)必使用質(zhì)粒提取試劑盒中去蛋白液盡量去除核酸酶，以防提取的質(zhì)粒被降解。pUC19質(zhì)粒檢測轉化效率>0.5×10⁹ cfu/μg DNA。

操作方法

1. BW25113感受態(tài)細胞從-80℃拿出，迅速插入冰中，5分鐘后待菌塊融化，加入目的DNA（質(zhì)?；蜻B接產(chǎn)物）并用手bo打EP管底輕輕混勻(避免用槍吸打)，冰中靜置25分鐘。

2. 42℃水浴熱激45秒，迅速放回冰上并靜置2分鐘，晃動(dòng)會(huì )降低轉化效率。

3. 向離心管中加入700 μl不含抗生素的無(wú)菌培養基 (2YT或LB)，混勻后37℃，200 rpm復蘇60分鐘。

4. 5000 rpm離心1分鐘收集菌體，留取100 μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應抗生素的2YT或LB培養基上。

5. 將平板倒置放于37℃培養箱過(guò)夜培養。

注意事項

1. 感受態(tài)細胞適宜在冰中緩慢融化。插入冰中8分鐘內加入目標DNA，不可在冰中放置時(shí)間過(guò)長(cháng)，長(cháng)時(shí)間存放會(huì )降低轉化效率。

2. 轉化高濃度的質(zhì)?；蚋咝实倪B接產(chǎn)物可相應減少終用于涂板的菌量。