Stbl2化學(xué)感受態(tài)細胞

產(chǎn)品規格CAT#: BFNC86012-01(10×100ul)/BFNC86012-02(50×100ul)

Stbl2：                                                       100μl/支

pUC19 (control vector，10pg/μl):                   10μl

保存條件(保質(zhì)期)：                            -80℃（6個(gè)月）

基因型

F- mcrAΔ(mcrBC-hsdRMS-mrr)recA1 endA1 lon gyrA96 thi supE44 relA1λ^-Δ(lac-proAB)

產(chǎn)品說(shuō)明

Stbl2菌株來(lái)源于 JM109 E. coli strain，適合克隆不穩定插入片段 (正向重復序列，逆轉錄病毒序列等)； mcrA突變和mcrBC-hsd RMS-mrr deletion 使該菌株更適于克隆甲基化的基因組序列；同時(shí)Stbl2也可用于慢病毒載體的構建。recA1和endA1的突變有利于克隆DNA的穩定和高純度質(zhì)粒DNA的提取。不存在lacI^qZΔM15，不可用于藍、白斑篩選。

青旗生物生產(chǎn)的Stbl2感受態(tài)細胞經(jīng)特殊工藝制作，pUC19檢測轉化效率可達10⁹ cfu/μg DNA。

Stbl2化學(xué)感受態(tài)細胞

操作方法

1. Stbl2感受態(tài)細胞從-80℃拿出，迅速插入冰中，5分鐘后待菌塊融化，加入目的DNA (質(zhì)?；蜻B接產(chǎn)物) 并用手bo打EP管底輕輕混勻 (避免用槍吸打)，冰中靜置25分鐘。

2. 42℃水浴熱激45秒，迅速放回冰上并靜置2分鐘，晃動(dòng)會(huì )降低轉化效率。

3. 向離心管中加入0.9 mL室溫S.O.C.或LB培養基(S.O.C.營(yíng)養豐富，可提高轉化效率)。

4. 37℃，225 rpm復蘇60分鐘或30℃，225 rpm復蘇90分鐘。

(當質(zhì)粒中含有不穩定片段時(shí)，30℃培養可降低錯誤重組的概率，若轉化control pUC19計算轉化效率，則需37℃，225 rpm復蘇60分鐘）

5. 5000rpm離心一分鐘收菌，留取100 μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應抗生素的S.O.C.或LB培養基上。

6. 將平板倒置放于37℃或30℃培養箱過(guò)夜培養。

(當質(zhì)粒中含有不穩定片段時(shí)，30℃培養可降低錯誤重組的概率，若轉化control pUC19計算轉化效率，則需37℃培養過(guò)夜)

注意事項

1. 感受態(tài)細胞適宜在冰中緩慢融化，插入冰中8分鐘內加入目標DNA，不可在冰中放置時(shí)間過(guò)長(cháng)，長(cháng)時(shí)間存放會(huì )降低轉化效率。

2. 混入質(zhì)?；蜻B接產(chǎn)物時(shí)應輕柔操作。

3. 轉化高濃度的質(zhì)?；蚋咝实倪B接產(chǎn)物可相應減少終用于涂板的菌量。

4. S.O.C.或LB培養基均可使用，S.O.C.可提高轉化效率20%；實(shí)驗人員可選擇在37℃或30℃培養細胞，37℃條件下，菌生長(cháng)速度加快，有利于提高質(zhì)粒產(chǎn)量，30℃培養可降低錯誤重組概率。