MC1061F-化學(xué)感受態(tài)細胞

產(chǎn)品規格CAT#: BFNC86027-01(10×100ul)/BFNC86027-02(50×100ul)

MC1061F-：                                               100μl/支

pUC19 (control vector，10pg/μl):                   10μl

保存條件(保質(zhì)期)：                            -80℃（6個(gè)月）

基因型

araD139 Δ (araA-leu)7697 Δ(lac)X74 galK16 galE15(GalS) lambda- e14- mcrA0 relA1 rpsL150

(Str^R) spoT1 mcrB1 hsdR2

MC1061F-化學(xué)感受態(tài)細胞

產(chǎn)品說(shuō)明

MC1061F-菌株來(lái)源于E.coli B/r型SB3118菌株，同時(shí)也是DH10b及*0的母本菌株。MC1061F-化轉感受態(tài)細胞轉化效率*，可用作實(shí)驗室的常規質(zhì)粒構建及噬菌體展示實(shí)驗，但缺乏F`因子，不能用于絲狀噬菌體（比如M13）的感染。不含核酸酶endA1突變，體內核酸酶含量較高，提取質(zhì)粒時(shí)務(wù)必使用質(zhì)粒提取試劑盒中去蛋白液盡量去除核酸酶對質(zhì)粒的污染。此菌株具有鏈霉素抗性。

青旗生物的生產(chǎn)的MC1061F-感受態(tài)細胞經(jīng)特殊工藝制作，pUC19質(zhì)粒檢測轉化效率>2×10⁹ cfu/μg DNA。

操作方法

1. MC1061F-感受態(tài)細胞從-80℃拿出，迅速插入冰中，5分鐘后待菌塊融化，加入目的DNA（質(zhì)?；蜻B接產(chǎn)物）并用手bo打EP管底輕輕混勻(避免用槍吸打)，冰中靜置25分鐘。

2. 42℃水浴熱激45秒，迅速放回冰上并靜置2分鐘，晃動(dòng)會(huì )降低轉化效率。

3. 向離心管中加入700 μl不含抗生素的無(wú)菌培養基 (2YT或LB)，混勻后37℃，200 rpm復蘇60分鐘。

4. 5000 rpm離心1分鐘收集菌體，留取100 μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應抗生素的2YT或LB培養基上。

5. 將平板倒置放于37℃培養箱過(guò)夜培養。如果進(jìn)行藍白斑篩選操作，將平板放37℃培養至少15 h。

注意事項

1. 感受態(tài)細胞適宜在冰中緩慢融化。插入冰中8分鐘內加入目標DNA，不可在冰中放置時(shí)間過(guò)長(cháng)，長(cháng)時(shí)間存放會(huì )降低轉化效率。

2. 轉化高濃度的質(zhì)?；蚋咝实倪B接產(chǎn)物可相應減少終用于涂板的菌量。